產品名稱：NEB Q5定點突變試劑盒-不含感受態細胞(E0552S)現貨供應

產品貨號：E0552S

產品品牌：NEB

產品簡介：

Q5定點突變試劑盒（不含感受態細胞）可以在2小時內快速對雙鏈質粒DNA進行定點突變。該試劑盒使用穩定的Q5熱啟動超保真DNA聚合酶，結合客戶自行設計的引物，在各種質粒中引入插入、缺失和替換突變。PCR后將擴增材料直接添加到du特的激酶-連接酶-DpnI（KLD）酶混合液中，進行快速室溫環化和模板去除（5分鐘）。將質粒轉化到高效級E.coli感受態細胞（不隨試劑盒提供），以確保轉化長度至少為20kb的質粒能獲得穩定的結果。也提供含感受態細胞的試劑盒

實驗數據：

使用預混液、du特的多酶 KLD 酶混合液和快速聚合酶可確保大多數質粒的突變反應在兩小時內完成。

注意事項：

1.如果得到的質粒不包含所需的突變（野生型序列），建議在PCR步驟中使用≤10ng的模板。另外，也可將KLD溫育時間延長至30-60分鐘來減少野生型質粒的背景。

2.如果沒有菌落或菌落很少，請確保引物設計正確。除引入缺失外，設計的兩條引物的5′末端應背靠背對齊，以利于進行指數擴增。為得到最佳結果，推薦使用NEB在線引物設計軟件NEBaseChanger™設計引物并計算退火溫度。

3.如果沒有PCR產物或產物很少，請確保使用了最佳退火溫度（Ta）。高保真聚合酶適合Tm+3退火溫度。使用NEB在線引物設計軟件NEBaseChanger™計算Ta。另外，可以使用梯度PCR和瓊脂糖凝膠分析來確定最佳退火溫度。

產品選購：

天津益元利康生物科技有限公司提供NEB Q5定點突變試劑盒-不含感受態細胞(E0552S)現貨供應，歡迎選購！