一個成功的IHC實驗，以下七個環節至關重要，如同一個精密的鏈條，缺一不可。

免疫組化（IHC）核心技術要點一：樣本制備 - 基石

組織固定：

要點： 及時、充分、適度。離體組織應盡快（通常30分鐘內）放入足量（10-20倍體積）的10%中性福爾馬林緩沖液中。

目的： 保存抗原性，防止降解和彌散。固定不足會導致抗原丟失；固定過度會遮蔽抗原表位，導致后續抗原修復困難。

石蠟包埋與切片：

要點： 組織脫水、透明、浸蠟過程要ce底但不過度。切片厚度通常為3-5μm，要求平整、無褶皺、無裂痕。

目的： 獲得高質量的組織切片，為后續染色提供基礎。

免疫組化（IHC）核心技術要點二：抗原修復 - 關鍵步驟

為什么需要： 福爾馬林固定會使蛋白質交聯，遮蔽抗原表位。抗原修復的目的是打破這些交聯，使抗原重新暴露。

主要方法：

熱誘導表位修復（HIER）： zui常用。使用檸檬酸鹽（pH 6.0）或EDTA/EGTA（pH 8.0-9.0）緩沖液，在微波爐、高壓鍋或水浴鍋中加熱。pH值的選擇對某些抗體至關重要。

酶消化修復： 使用胰蛋白酶、胃蛋白酶等。適用于部分固定過度或特定抗原。

要點： 根據目標抗原和一抗說明書，優化修復方法和pH值。修復后需自然冷卻，避免驟冷。

免疫組化（IHC）核心技術要點三： 內源性過氧化物酶阻斷

要點： 在加入一抗前，用3% H?O?溶液處理切片，孵育10-15分鐘。

目的： 阻斷組織內源性的過氧化物酶（尤其在紅細胞、粒細胞中），防止在后續DAB顯色時產生非特異性背景著色。

免疫組化（IHC）核心技術要點四：封閉

要點： 使用與二抗來源同種的正常血清（如，二抗是山羊抗兔，則用正常山羊血清）或BSA（牛血清白蛋白），室溫封閉20-30分鐘。

目的： 封閉組織切片上非特異性的蛋白質結合位點，減少一抗、二抗的非特異性吸附，降低背景。

免疫組化（IHC）核心技術要點五：抗體孵育- 核心反應

一抗孵育：

要點： 抗體濃度、孵育時間和溫度是三大關鍵變量。必須參照說明書并進行預實驗優化。孵育通常在4°C過夜（特異性好）或室溫1-2小時（快速）。

目的： 特異性識別并結合目標抗原。

二抗孵育：

要點： 二抗需與一抗的種屬和亞型匹配。通常室溫孵育30-60分鐘。

目的： 攜帶標記物（如酶HRP或熒光基團）與一抗結合，起放大信號的作用。

免疫組化（IHC）核心技術要點六：顯色

要點： zui常用的是DAB（二氨基聯苯胺） 顯色。DAB在HRP催化下產生棕褐色不溶性沉淀。

關鍵： 鏡下控制顯色時間！ 通常在顯微鏡下觀察，待特異性信號清晰而背景未著色時立即終止反應（一般幾十秒到幾分鐘）。時間過短則信號弱，過長則背景深。

其他： AEC（紅色）等，但產物溶于有機溶劑，需水性封片劑封片。

免疫組化（IHC）核心技術要點七：復染、脫水、封片

復染： 常用蘇木精（Hematoxylin） 對細胞核進行藍色復染，提供組織形態學對照。

脫水透明： 經酒精梯度脫水，二甲苯透明，使組織透亮。

封片： 使用中性樹膠封片，長期保存。

天津益元利康生物科技有限公司，提供實驗中所需抗體、緩沖液等。

一、輻射五大服務方向：

1.國內試劑耗材經銷代理；

2.國外試劑訂購（直訂，或境外代理）；

3.基因組測序（二代，二代+三代）；

4.基因分型（SNP檢測）：低/中/中 高通量項目；

5.生物樣本運輸（國內、）；

二、多家代理品牌，涉及30多種，經營代理500多個品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、origene、

Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、

NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam

CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi

BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix

International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck

Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、coaChrom

ZYMO、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation

Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra

stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs

GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech

horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

所有生物試劑耗材都可以進口，特別是冷門品牌，均能給客戶購買到。價格優，貨期短，可加急，較快10天到貨；保證服務質量，所有產品均提供售后服務。大部分客戶我們提供貨到付款服務，

公司自成立依靠過硬的服務和良好的信譽與各大企事業單位、科研單位建立長期合作。客戶包括北大，清華，地大，中科院各所，各大藥企等等。

專業訂購國內外試劑耗材，常備現貨，一手貨源，歡迎合作。